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動(dòng)物源食品中8種氨基糖苷類(lèi)藥物殘留檢測(cè)方法――超高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法(一)
發(fā)布時(shí)間：2017-09-01
1、安全要求
實(shí)驗(yàn)操作時(shí)穿工作服、戴口罩和手套；提取和凈化操作都應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，避免溶劑氣體吸人和皮膚接觸；廢棄的化學(xué)試劑收集到專(zhuān)用容器中集中處理。
2、急救措施
皮膚接觸到有機(jī)溶劑或酸、堿溶液后用清水清洗，有機(jī)溶劑或酸、堿溶液濺入眼中用清水灌洗。
3、適用范圍
該標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程適用于牛奶、豬肌肉、豬肝臟和豬腎臟中鏈霉素、雙氫鏈霉素、慶大霉素C1、卡那霉素、阿米卡星、大觀霉素、安普霉素和新霉素8種氨基糖苷類(lèi)藥物單個(gè)或混合物殘留量的確證檢測(cè)。
4、職責(zé)
進(jìn)行該項(xiàng)檢驗(yàn)的檢驗(yàn)員必須按該標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行檢驗(yàn)，質(zhì)量監(jiān)督員負(fù)責(zé)監(jiān)督該標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的正確執(zhí)行。
5、檢測(cè)原理
供試樣品經(jīng)磷酸二氫鉀緩沖溶液提取后，調(diào)其pH值，經(jīng)CBX固相萃取柱凈化，濃縮后殘余物用HFBA溶液溶解，供超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定。
6、方法靈敏度
鏈霉素、雙氫鏈霉素、慶大霉素C1、卡那霉素、阿米卡星、大觀霉素、安普霉素和新霉素在牛奶、豬肌肉、豬肝臟和豬腎臟中的檢測(cè)限為5μg/kg，定量限為10μg/kg。
7、注意事項(xiàng)
操作過(guò)程中盡可能用塑料試管，不用玻璃試管。
8、材料、儀器、試劑的準(zhǔn)備及基本要求
除特別注明外，以下所用試劑均為分析純；水為符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。
8.1對(duì)照品、試劑和藥物儲(chǔ)備液、工作液準(zhǔn)備
8.1.1鏈霉素、雙氫鏈霉素、慶大霉素C1、卡那霉素、阿米卡星、大觀霉素、安普霉素和新霉素對(duì)照品 純度均大于98.0％。
8.1.2甲醇 色譜純
8.1.3乙腈 色譜純
8.1.4磷酸二氫鉀
8.1.5三氯乙酸
8.1.6 Na2EDTA(含2個(gè)結(jié)晶水)
8.1.7乙酸
8.1.8七氟丁酸酐(HFBA)
8.1.9 10mmol/L磷酸二氫鉀緩沖液(含0.4mmol/L EDTA和2％三氯乙酸) 稱(chēng)取2.72g磷酸二氫鉀，溶解于2L水中，用lmol/L鹽酸溶液調(diào)pH值至4.0；再加入0.3gNa2EDTA(含2個(gè)結(jié)晶水)和40g三氯乙酸，混勻即得。
8.1.10 10％乙酸甲醇溶液量取5mL乙酸，溶于45mL甲醇中，混勻即得。
8.1.1 1 30％氫氧化鈉溶液稱(chēng)取30g氫氧化鈉，用水溶解并稀釋至100mL，混勻即得。
8.1.12 1tool／L鹽酸溶液取9mL鹽酸，加水稀釋至100mL，混勻即得。
8.1.13 5mmol/L七氟丁酸酐(HFBA)取0.25mL HFBA，加水稀釋至200mL，混勻即得。
8.1.14氨基糖苷類(lèi)藥物標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1mg/mL) 準(zhǔn)確稱(chēng)取適量的鏈霉素、雙氫鏈霉素、慶大霉素C1、卡那霉素、阿米卡星、大觀霉素、安普霉素和新霉素標(biāo)準(zhǔn)品，用水分別配制成lmg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。配制完后都轉(zhuǎn)移至塑料試管內(nèi)于4℃下保存，有效期為1個(gè)月。
8.1.15氨基糖苷類(lèi)藥物混合標(biāo)準(zhǔn)工作液(10μg/mL) 分別準(zhǔn)確吸取1.0mL的鏈霉素、雙氫鏈霉素、慶大霉素C1、卡那霉素、阿米卡星、大觀霉素、安普霉素和新霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻即得。配制完后轉(zhuǎn)移至塑料試管內(nèi)于4℃下保存，有效期為1個(gè)月。
8.2儀器和設(shè)備
8.2.1 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(配電噴霧離子源)
8.2.2分析天平 感量0.00001g
8.2.3天平 感量0.01g
8.2.4渦旋混合器
8.2.5高速離心機(jī)
8.2.6 pH計(jì)
8.2.7固相萃取裝置
8.2.8 cBX固相萃取柱500mg/6mL，或相當(dāng)者；
8.2.9氮吹儀
9、檢驗(yàn)步驟
9.1試樣的制備
9.1.1 取均質(zhì)的供試樣品，作為供試試料。
9.1.2取均質(zhì)的空白樣品(2±0.02)g，作為空白試料(陰性對(duì)照)。
9.1.3 取均質(zhì)的空白樣品(2±0.02)g，添加4μg/mL標(biāo)準(zhǔn)工作液0.1mL，作為空白添加試樣(陽(yáng)性對(duì)照)。
9.2提取
9.2.1稱(chēng)取(2±0.02)g試料，加10mmol/L磷酸二氫鉀緩沖溶液(含0.4mmol/L ED-TA和2％三氯乙酸)8mL，渦旋混合后，中速振蕩提取5min，10000r/min離心10min，取上清液于另一50mL離心管內(nèi)。
9.2.2重復(fù)提取一次，合并上清液；調(diào)其pH值至7.5～8.0，10000r/min離心10min，取上清液作為備用液。
9.3凈化
9.3.1 CBX小柱依次用甲醇、水各3mL活化。
9.3.2取全部備用液過(guò)柱，控制流速為1～3mL/min。
9.3.3用水5mL以同樣速度淋洗柱子，抽干。
9.3.4用10％乙酸甲醇溶液3mL洗脫于塑料試管內(nèi)。
9.3.5洗脫液于400C下氮?dú)獯蹈伞?/sup>
殘余物加入5mmol/HFBA水溶液0.2mL，充分渦旋混勻；轉(zhuǎn)至1.5mL塑料離心管內(nèi)，15000r/min離心10min，取適量上清液供超高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。
9.4測(cè)定
9.4.1色譜條件
9.4.1.1色譜柱：BEH C1850mm×2.1mm(i.d.)，粒徑1.7μm，或相當(dāng)者；
9.4.1.2柱溫：300C；
9.4.1.3進(jìn)樣量：10μL；
9.4.1.4流動(dòng)相A：20mmol/L HFBA乙腈溶液；
流動(dòng)相B：20mmol/L HFBA水溶液；
流動(dòng)相梯度洗脫條件見(jiàn)表1。
9.4.2質(zhì)譜條件
9.4.2.1離子源參考參數(shù)，見(jiàn)表2。
9.4.2.2質(zhì)量分析器參考參數(shù)見(jiàn)表3。
9.4.2.3 光電倍增器電壓：650V
9.4.2.4 定性、定量離子對(duì)、錐孔電壓和碰撞能量見(jiàn)表4。
參考資料：獸藥殘留檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程
