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動物源食品中8種糖皮質(zhì)激素類藥物殘留檢測方法――超高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法(一）
發(fā)布時間：2017-09-01
1、安全要求
實驗操作時穿工作服、戴口罩和手套；提取和凈化操作都應(yīng)在通風(fēng)櫥中進行，避免溶劑氣體吸人和皮膚接觸；廢棄的化學(xué)試劑收集到專用容器中集中處理。
2、急救措施
皮膚接觸到有機溶劑或酸、堿溶液后用清水清洗，有機溶劑或酸、堿溶液濺入眼中用清水灌洗。
3、適用范圍
該標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程適用于豬、牛、羊的肝臟和肌肉、雞肌肉、雞蛋、牛奶中潑尼松、潑尼松龍、地塞米松、倍他米松、氟氫可的松、甲基潑尼松、倍氯米松和氫化可的松單個或多個藥物殘留量的檢測。
4、職責(zé)
進行該項檢驗的檢驗員必須按該標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進行檢驗，質(zhì)量監(jiān)督員負(fù)責(zé)監(jiān)督該標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的正確執(zhí)行。
5、檢測原理
組織樣品經(jīng)堿水解，乙酸乙酯提取，牛奶和雞蛋樣品直接用乙酸乙酯提取，提取液用Silica柱凈化，超高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法進行檢測，外標(biāo)法定量。
6、方法靈敏度
潑尼松、潑尼松龍、甲基潑尼松龍、地塞米松、倍他米松在牛奶中的定量限為0.2μg/L，肌肉和雞蛋中定量限為0.5μg/kg,肝臟中定量限為1μg/kg；倍氯米松和氟氫可的松在牛奶中定量限為0.4μg/L，肌肉和雞蛋中定量限為lμg/kg，肝臟中定量限為2μg/kg；氫化可的松在牛奶中定量限為O.8μg/L，肌肉和雞蛋中定量限為2μg/kg，肝臟中定量限為4μg/kg。
7、注意事項
旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干時，水浴溫度不要太高，控制在約40℃。
8、材料、儀器、試劑的準(zhǔn)備及基本要求除特別注明外，以下所用試劑均為分析純；水為符合GB/T6682規(guī)定的一級水。
8.1 對照品、試劑和藥物儲備液、工作液
8.1.1 潑尼松對照品 純度≥98％
8.1.2 潑尼松龍對照品 純度≥99.5％
8.1.3 地塞米松對照品 純度)99.5％
8.1.4 倍他米松對照品 純度≥99.5％
8.1.5 氟氫可的松乙酸鹽對照品 純度≥98％
8.1.6 甲基潑尼松對照品 純度≥99.5％
8.1.7 倍氯米松對照品 純度≥99.5％
8.1.8 氫化可的松對照品 純度≥99.5％
8.1.9 甲醇色譜純
8.1.10 正己烷
8.1.11 乙腈色譜純
8.1.12 乙酸乙酯
8.1.13 丙酮
8.1.14 甲酸
8.1.15 氫氧化鈉
8.1.16 0.1mol/L氫氧化鈉溶液 稱取4.0g氫氧化鈉，用水溶解，稀釋定容至1 000mL。
8.1.17 正己烷一丙酮溶液(6/4，v/v)
8.1.18 0.1％甲酸溶液 移取1mL甲酸，用水定容至1000mL，搖勻即得。
8.1.19 標(biāo)準(zhǔn)儲備液的配制(1mg/mL) 分別精密稱取適量的糖皮質(zhì)激素類藥物標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解定容，分別配制成1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。-200C冰箱中保存，有效期為6個月。
8.1.20標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制(20ng／mL) 準(zhǔn)確量取糖皮質(zhì)激素類藥物標(biāo)準(zhǔn)儲備液各0.1mL，置于同一10mL量瓶內(nèi)，用甲醇稀釋至刻度，即為濃度為10μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液；從中準(zhǔn)確量取0.1mL，置于一lOmL量瓶內(nèi)，用甲醇稀釋至刻度，即為濃度為100g/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液；從中準(zhǔn)確量取2.OmL，置于一10mL量瓶內(nèi)，用20％乙腈水溶液稀釋至刻度，即成20ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，現(xiàn)配現(xiàn)用。
8.2 儀器和設(shè)備
8.2.1 超高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜儀(配電噴霧離子源)
8.2.2 天平感量0.01g
8.2.3 分析天平感量0.00001g
8.2.4 高速冷凍離心機
8.2.5 振蕩器
8.2.6渦旋混合器
8.2.7組織勻漿機
8.2.8氮吹儀
8.2.9旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀
8.2.10固相萃取柱Silica柱(500mg/6mL)，或相當(dāng)者
9、檢驗步驟
9.1 試樣的制備
9.1.1 取均質(zhì)的供試樣品，作為供試試料。
9.1.2 取均質(zhì)的空白樣品(2±0.02)g，作為空白試料(陰性對照)。
9.1.3 取均質(zhì)的空白樣品(2±0.02)g，添加20ng/mL標(biāo)準(zhǔn)工作液0.2mL，作為空白添加試樣(陽性對照)。
9.2提取
9.2.1 組織樣品
9.2.1.1稱取組織試料(2±0.02)g于50mL離心管中，加乙酸乙酯15mL，渦旋混合，
8000r／min離心15min，移取乙酸乙酯層；于殘渣中加0.1mol/L氫氧化鈉溶液10mL，混勻，加乙酸乙酯20mL，渦旋混合，低速搖床振動15min，8000r/min離心15min，移取乙酸乙酯層；合并兩次提取液。
9.2.1.2 提取液于4023下旋轉(zhuǎn)蒸至近干，加乙酸乙酯lmL和正己烷5mL，溶解殘渣，待凈化。
9.2.2 牛奶和雞蛋樣品
9.2.2.1 取牛奶或雞蛋試料(2±0.02)g于50mL離心管中，加乙酸乙酯20mL，渦旋混合，低速搖床振蕩15min，8000r/min離心15min。
9.2.2.2移取乙酸乙酯層于4023下旋轉(zhuǎn)蒸至近干，加乙酸乙酯1mL和正己烷5mL，溶解殘渣，待凈化。
9.3凈化
9.3.1 Silica小柱用正己烷6mL活化。
9.3.2取全部備用液過柱。
9.3.3 用正己烷6mL淋洗，減壓抽干。
9.3.4 用正己烷一丙酮(6/4，v/v)6mL洗脫。
9.3.5 洗脫液于5023下氮氣吹干。殘余物用20％乙腈水溶液0.5mL溶解，轉(zhuǎn)入1.5mL離心管中，15000r／min離心20min，取適量上清液，過濾膜后供超高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法測定。
9.4 測定
9.4.1 色譜條件
9.4.1.1 色譜柱：BEH C1850mm×2.1mm(i.d.)，粒徑1.7μm，或相當(dāng)者；
9.4.1.2 柱溫：30℃；
9.4.1.3 進樣量：10μL；
9.4.1.4 流動相A：乙腈；
流動相B：0.1％甲酸水溶液；
流動相梯度洗脫條件見表1。
參考資料：獸藥殘留檢測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程
