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動(dòng)物源食品中13種盧-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物殘留檢測(cè)方法――超高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法（一）
發(fā)布時(shí)間：2017-09-01
1、安全要求
實(shí)驗(yàn)操作時(shí)穿工作服、戴口罩和手套；提取和凈化操作都應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，避免溶劑氣體吸入和皮膚接觸；廢棄的化學(xué)試劑收集到專(zhuān)用容器中集中處理。
2、急救措施
皮膚接觸到有機(jī)溶劑或酸、堿溶液后用清水清洗，有機(jī)溶劑或酸、堿溶液濺入眼中用清水灌洗。
3、適用范圍
該標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程適用于牛奶、豬、雞肌肉和腎臟中青霉素G、青霉素V、阿莫西林、羧芐西林、氨芐西林、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林、頭孢喹肟、頭孢氨芐、頭孢拉定、頭孢唑啉和頭孢哌酮單個(gè)或多個(gè)藥物殘留量的檢測(cè)。
4、職責(zé)
進(jìn)行該項(xiàng)檢驗(yàn)的檢驗(yàn)員必須按該標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行檢驗(yàn)，質(zhì)量監(jiān)督員負(fù)責(zé)監(jiān)督該標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的正確執(zhí)行。
5、檢測(cè)原理
供試樣品中的殘留藥物用水和乙腈提取后，用正己烷去除脂肪，再用C18固相萃取柱去除雜質(zhì)，濃縮后供超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定。
6、方法靈敏度
青霉素G、青霉素V、阿莫西林、羧芐西林、氨芐西林、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林、頭孢喹肟、頭孢氨芐、頭孢拉定、頭孢唑啉和頭孢哌酮在牛奶、豬、雞肌肉和腎臟中的檢測(cè)限為1μg/kg，定量限為2μg/kg。
7、注意事項(xiàng)
C18柱活化后要保持柱床濕潤(rùn)，避免出現(xiàn)干涸現(xiàn)象。
8、材料、儀器、試劑的準(zhǔn)備及基本要求
除特別注明外，以下所用試劑均為分析純；水為符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。
8.1對(duì)照品、試劑和藥物儲(chǔ)備液、工作液準(zhǔn)備
8.1.1青霉素G、青霉素V、阿莫西林、羧芐西林、氨芐西林、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林、頭孢喹肟、頭孢氨芐、頭孢拉定、頭孢唑啉和頭孢哌酮對(duì)照品 純度均大于95.0％
8.1.2乙腈 色譜純
8.1.3正己烷
8.1.4 甲酸
8.1.5標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1mg/mL) 準(zhǔn)確稱(chēng)取適量的青霉素G、青霉素V、阿莫西林、羧芐西林、氨芐西林、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林、頭孢喹肟、頭孢氨芐、頭孢拉定、頭孢唑啉和頭孢哌酮對(duì)照品，用50％乙腈水溶液溶解稀釋?zhuān)謩e配制成1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。4℃下保存，有效期為1周。
8.1.6混合標(biāo)準(zhǔn)工作液(1μg/ mL) 分別準(zhǔn)確吸取0.1mL的青霉素G、青霉素V、阿莫西林、羧芐西林、氨芐西林、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林、頭孢喹肟、頭孢氨芐、頭孢拉定、頭孢唑啉和頭孢哌酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液至10mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻即得。4℃下保存，有效期為l周。
8.2儀器和設(shè)備
8.2.1超高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜儀(配電噴霧離子源)
8.2.2分析天平 感量0.00001g
8.2.3天平 感量0.0lg
8.2.4高速離心機(jī)
8.2.5渦旋混合器
8.2.6水平振蕩器
8.2.7固相萃取裝置
8.2.8．BakerBond C18固相萃取柱：1000mg/6mL，或相當(dāng)者
8.2.9氮吹儀
8.2.10濾膜0.22μm
9、檢驗(yàn)步驟
9.1試樣的制備
9.1.1取均質(zhì)的供試樣品，作為供試試料。
9.1.2取均質(zhì)的空白樣品(2±0.02)g，作為空白試料(陰性對(duì)照)。
9.1.3取均質(zhì)的空白樣品(2±0.02)g，添加200ng/mL標(biāo)準(zhǔn)工作液0.1mL，作為空白添加試樣(陽(yáng)性對(duì)照)。
9.2提取
9.2.1 稱(chēng)取(2±0.02)g勻質(zhì)樣品，置于50mI．離心管內(nèi)，加水2mL和乙腈8mL(牛奶樣品直接加乙腈8mL)，渦旋混合后中速振蕩5min，10000r/min離心10min。
9.2.2取上清液于另一50mI．離心管內(nèi)，加正己烷5mL，渦旋混合后中速振蕩5min，5000r/min離心5min，棄上層溶液，下層溶液作為備用液。
9.3凈化
9.3.1 C18小柱依次用乙腈5mL、水10mL活化。
9.3.2取全部備用液過(guò)柱同時(shí)收集于15mL玻璃試管內(nèi)，擠干。
9.3.3于400C下氮?dú)獯抵馏w積小于1mL，用水定容至1mL，充分渦旋混勻，轉(zhuǎn)移至1.5mL塑料離心管內(nèi)，15000r/min離心10min，取適量上清液過(guò)濾膜后，供超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。
9.4測(cè)定
9.4.1色譜條件
9.4.1.1 色譜柱：BEH C1850mm×2.1mm(i.d.)，粒徑1.7μm，或相當(dāng)者；
9.4.1.2柱溫：30℃；
9.4.1.3進(jìn)樣量：10μL；
9.4.1.4流動(dòng)相A：0.1％甲酸乙腈溶液；
流動(dòng)相B：0.1％甲酸水溶液；
流動(dòng)相梯度洗脫條件見(jiàn)表1。
9.4.2 質(zhì)譜條件
9.4.2.2 離子源參考參數(shù)，見(jiàn)表2。
9.4.2.2質(zhì)量分析器參考參數(shù)見(jiàn)表3。
9.4.2.3 光電倍增器電壓：650V
9.4.2.4 定性、定量離子對(duì)、錐孔電壓和碰撞能量見(jiàn)表4。
參考資料：獸藥殘留檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程
