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動物源食品中13種盧-內酰胺類藥物殘留檢測方法――超高效液相色譜一串聯質譜法（一）
發布時間：2017-09-01
1、安全要求
實驗操作時穿工作服、戴口罩和手套；提取和凈化操作都應在通風櫥中進行，避免溶劑氣體吸入和皮膚接觸；廢棄的化學試劑收集到專用容器中集中處理。
2、急救措施
皮膚接觸到有機溶劑或酸、堿溶液后用清水清洗，有機溶劑或酸、堿溶液濺入眼中用清水灌洗。
3、適用范圍
該標準操作規程適用于牛奶、豬、雞肌肉和腎臟中青霉素G、青霉素V、阿莫西林、羧芐西林、氨芐西林、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林、頭孢喹肟、頭孢氨芐、頭孢拉定、頭孢唑啉和頭孢哌酮單個或多個藥物殘留量的檢測。
4、職責
進行該項檢驗的檢驗員必須按該標準操作規程進行檢驗，質量監督員負責監督該標準操作規程的正確執行。
5、檢測原理
供試樣品中的殘留藥物用水和乙腈提取后，用正己烷去除脂肪，再用C18固相萃取柱去除雜質，濃縮后供超高效液相色譜-串聯質譜法測定。
6、方法靈敏度
青霉素G、青霉素V、阿莫西林、羧芐西林、氨芐西林、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林、頭孢喹肟、頭孢氨芐、頭孢拉定、頭孢唑啉和頭孢哌酮在牛奶、豬、雞肌肉和腎臟中的檢測限為1μg/kg，定量限為2μg/kg。
7、注意事項
C18柱活化后要保持柱床濕潤，避免出現干涸現象。
8、材料、儀器、試劑的準備及基本要求
除特別注明外，以下所用試劑均為分析純；水為符合GB/T6682規定的一級水。
8.1對照品、試劑和藥物儲備液、工作液準備
8.1.1青霉素G、青霉素V、阿莫西林、羧芐西林、氨芐西林、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林、頭孢喹肟、頭孢氨芐、頭孢拉定、頭孢唑啉和頭孢哌酮對照品 純度均大于95.0％
8.1.2乙腈 色譜純
8.1.3正己烷
8.1.4 甲酸
8.1.5標準儲備液(1mg/mL) 準確稱取適量的青霉素G、青霉素V、阿莫西林、羧芐西林、氨芐西林、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林、頭孢喹肟、頭孢氨芐、頭孢拉定、頭孢唑啉和頭孢哌酮對照品，用50％乙腈水溶液溶解稀釋，分別配制成1mg/mL的標準儲備液。4℃下保存，有效期為1周。
8.1.6混合標準工作液(1μg/ mL) 分別準確吸取0.1mL的青霉素G、青霉素V、阿莫西林、羧芐西林、氨芐西林、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林、頭孢喹肟、頭孢氨芐、頭孢拉定、頭孢唑啉和頭孢哌酮標準儲備液至10mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻即得。4℃下保存，有效期為l周。
8.2儀器和設備
8.2.1超高效液相色譜一串聯質譜儀(配電噴霧離子源)
8.2.2分析天平 感量0.00001g
8.2.3天平 感量0.0lg
8.2.4高速離心機
8.2.5渦旋混合器
8.2.6水平振蕩器
8.2.7固相萃取裝置
8.2.8．BakerBond C18固相萃取柱：1000mg/6mL，或相當者
8.2.9氮吹儀
8.2.10濾膜0.22μm
9、檢驗步驟
9.1試樣的制備
9.1.1取均質的供試樣品，作為供試試料。
9.1.2取均質的空白樣品(2±0.02)g，作為空白試料(陰性對照)。
9.1.3取均質的空白樣品(2±0.02)g，添加200ng/mL標準工作液0.1mL，作為空白添加試樣(陽性對照)。
9.2提取
9.2.1 稱取(2±0.02)g勻質樣品，置于50mI．離心管內，加水2mL和乙腈8mL(牛奶樣品直接加乙腈8mL)，渦旋混合后中速振蕩5min，10000r/min離心10min。
9.2.2取上清液于另一50mI．離心管內，加正己烷5mL，渦旋混合后中速振蕩5min，5000r/min離心5min，棄上層溶液，下層溶液作為備用液。
9.3凈化
9.3.1 C18小柱依次用乙腈5mL、水10mL活化。
9.3.2取全部備用液過柱同時收集于15mL玻璃試管內，擠干。
9.3.3于400C下氮氣吹至體積小于1mL，用水定容至1mL，充分渦旋混勻，轉移至1.5mL塑料離心管內，15000r/min離心10min，取適量上清液過濾膜后，供超高效液相色譜-串聯質譜儀測定。
9.4測定
9.4.1色譜條件
9.4.1.1 色譜柱：BEH C1850mm×2.1mm(i.d.)，粒徑1.7μm，或相當者；
9.4.1.2柱溫：30℃；
9.4.1.3進樣量：10μL；
9.4.1.4流動相A：0.1％甲酸乙腈溶液；
流動相B：0.1％甲酸水溶液；
流動相梯度洗脫條件見表1。
9.4.2 質譜條件
9.4.2.2 離子源參考參數，見表2。
9.4.2.2質量分析器參考參數見表3。
9.4.2.3 光電倍增器電壓：650V
9.4.2.4 定性、定量離子對、錐孔電壓和碰撞能量見表4。
參考資料：獸藥殘留檢測標準操作規程
