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葡萄酒中苯甲酸兩種檢測方法出現不同檢測結果的分析
發布時間：2013-11-25
《葡萄酒》國家標準中規定了苯甲酸及苯甲酸鈉的限量是≤50mg/L。檢測方法采用氣相色譜和液相色譜檢測兩種方法。控制苯甲酸及苯甲酸鈉限量的目的是對葡萄酒釀造工藝的質量控制。本文通過不同檢測方法之間苯甲酸含量測試結果存在偏差進行探討分析，旨在引起同行注意。
關鍵詞：檢測方法不同結果分析
筆者從事產品質量檢驗多年，在葡萄酒的質量檢驗工作中，發現采用GB/T5009.29苯甲酸測定方法中第一法和第二法檢測的數據有很大的出入，經過多次反復測試驗證，現象依舊存在，我們對發現的問題進行了比對分析，希望能夠引起同行們的關視，不當之處請同行批正。測試情況如下：
1·檢驗方法及步驟
我們對3個酒樣按照GB/T5009.29-2003中第二法液相色譜法規定的方法分別進行了處理和分析，發現只有一個樣品檢出苯甲酸，檢測過程中發現基線噪聲干擾較大，開始認為樣品沒處理好，之后對樣品加熱近干，進行定容過濾，經測試，弱偏低于第一次測試數據，基線噪聲干擾沒有改善。隨后又用了第一法氣相色譜法對樣品進行了處理測定，經檢測三個樣品均檢出了苯甲酸，經過加標回收試驗，回收率在70%-76%范圍以內，方法分別如下：
1.1液相色譜法
1.1.1試劑：
①甲醇色譜純經0.45um有機相濾膜過濾，超聲脫氣；
②稀氨水（1:1）；
③乙酸銨溶液0.15mol/L經0.45um水相濾膜過濾，超聲脫氣；
④苯甲酸溶液國家二級標準溶液。
1.1.2儀器：
①島津LC20高效液相色譜儀（雙泵帶紫外檢測器）；
②超聲波清洗機；
③電子天平；
④移液管等。
1.1.3分析步驟
①試樣處理：分別稱取10g試樣，放入小燒杯中，水浴加熱除去乙醇，用氨水（1+1）調PH約7.0，加水定容至10ml，經0.45um濾膜過濾備用。
②分析條件：
a紫外檢測器230nm波長0.2AUF；
b色譜柱：島津C184.6-15010um不銹鋼柱；
c流動相：甲醇：乙酸銨（5:95）；
d流速：1ml/min；
e進樣量：10ul。
1.1.4檢測結果
0.1mg/mL苯甲酸溶液做單標點曲線
樣01樣02樣031
8.3mg/l未檢出未檢出
檢測過程中發現基線噪聲干擾較大，開始認為樣品處理不到位，后重新對樣品加熱至近干，其他檢測方法條件不變，發現樣品因過度蒸發除苯甲酸有所損失以外，干擾并未多大改善。
1.2氣相色譜法
1.2.1試劑
①乙醚：經檢測不含過氧化物；
②石油醚；沸程30-60℃；
③鹽酸：優級純；
④無水硫酸鈉；
⑤鹽酸（1+1）：取100ml鹽酸用水稀釋至200ml；
⑥氯化鈉酸性溶液（40g/L）；
⑦苯甲酸：國家標準物質99.9%；
⑧苯甲酸使用液：用石油醚-乙醚（3+1）混合溶液經多次稀釋至：0、50、100、150、200、250ug制作曲線r=0.9996。
1.2.2儀器
①氣相色譜儀：安捷倫7890A型，具氫火焰離子化檢測器；
②色譜柱：食品添加劑檢測專用柱5.3um*15m石英毛細柱（蘭化）。
1.2.3分析步驟：吸取2.5ml混合均勻樣品，置于25ml帶塞量筒中，加0.5ml鹽酸（1+1）酸化，用15ml、10ml乙醚提取兩次，每次震搖1min，將上層乙醚吸入另一個25ml帶塞量筒中，合并兩次的提取液。用3ml氯化鈉溶液洗劑兩次，靜止15min，用滴管將醚層通過無水硫酸鈉慮入25ml容量瓶中，加乙醚定容，混勻。準確吸取5ml乙醚提取液于10ml刻度試管中，置40℃水浴揮干、加入2ml石油醚-乙醚混合溶劑溶解殘渣，備用。
色譜條件：
①氣體流速：氮氣≥99.999%50ml/min
②溫度：進樣口230℃；檢測器230℃，柱溫170℃，不分流
③進樣量2ul5min出峰標準曲線相關系數r=0.9996
1.2.4接測結果
樣01樣02樣03
70mg/l19mg/l37mg/l
之后，為了慎重考慮，我們又將01#樣品送省級質檢機構檢測，省級質檢機構采用了液相色譜法，其檢測結果為18mg/l。由以上結果可以看出，省級質檢機構所檢數據與我所液相方法測定數據接近，因此說明我所采用液相色譜法檢測葡萄酒中苯甲酸含量是比較準確可行的。
2·結果分析
通過以上分析對比，我們分析如下：
2.1使用液相方法比較方便，但樣品中干擾成分較多，導致基線噪聲干擾較大，儀器檢出限降低，再則由于液相色譜精度低于氣相色譜精度，而葡萄酒中苯甲酸含量處于低微量級，就好像用臺秤去稱量幾十克的物品一樣，數據的系統誤差當然出入較大。而氣相色譜檢測方法采用溶劑提取，有效地分離了干擾成分，基線噪聲干擾降低，精度提高，加之氣相色譜精度高，因此檢測的數據較接近樣品真值。
2.2液相色譜檢測方法樣品處理有損失，經查閱資料和實驗證明，苯甲酸在酸性溶液中加熱容易隨水蒸氣揮發，致使檢出數據偏低。而氣相檢測方法處理樣品采溶劑提取，通過回收率校正損失較小，因此檢測數據比液相檢測數據高。
3·探討及建議
由此可以看出，GB/T5009.29中的液相色譜法并不適合于檢測《葡萄酒》標準中規定的苯甲酸指標。但是在GB2760《食品添加劑使用衛生標》中規定葡萄酒苯甲酸含量≤800mg/kg，是作為食品添加劑來檢測，其加入量遠遠大于《葡萄酒》標準中規定的苯甲酸含量，兩個標準中的苯甲酸存在本質上的區別：即一個苯甲酸是自然產生的，含量低，不適合液相法檢測；另一個是人為添加的，含量高，采用液相法能夠滿足要求。看來，選用哪個方法測試葡萄酒中的苯甲酸，我們只能按照產品標簽的配料表來選擇了。建議相關標準起草部門研究制定發布新的檢測方法，規范指導檢驗檢測行為。
